石蜡切片冰冻切片超薄切片解读

石蜡切片技术

虽然21世纪医学高科技迅猛发展、日新月异，新的诊断方法层出不穷，但迄今为止，即使是世界上最发达国家，疾病的确诊主要还是通过病理诊断。病理诊断是所有其他诊断（包括临床诊断、影像诊断、实验室检查诊断乃至分子诊断）的金标准。因此学习相关病理诊断技术具有重要意义。病理技术不仅可以作为临床诊断的金标准，还可以帮助临床查明死因，对研究生来说还可以提供教学、科研的资料。

病理学科是一门基础与临床之间起着桥梁作用的重要学科，病理研究方法在技术工作上又是多方面的，有尸体解剖，大体标本的制作、制片技术（石蜡切片、冰冻切片、火棉胶切片、半薄切片、超薄切片）组织化学方法，免疫酶标技术、荧光技术、摄影技术等。.

硕士研究生学习的课题研究阶段，往往需要自己设计并亲自动手操作，为满足研究生的实际需要，本章简要介绍常用的病理学有关技术，并注意尽量做到:？突出实用性:以行之有效的病理学常用技术为主线，围绕硕士研究生的实际需要，对病理学技术的原理、相关理论及具体操作方法、步骤等进行阐述

一节组织制片的概述

组织制片技术的应用，从1665年由H0Ok发现细胞开始，已有300多年的历史。最早应用冰冻切片；随后又进一一步利用石蜡的硬度，以石蜡包埋组织，制成石腊切片；后来又利用明胶、火棉胶、碳蜡和塑料等物质的韧性，以其包埋组织而制作切片。

组织制片技术随着生物学和医学的发展而发展。切片染色方法可以显示不同细胞和组织形态，以及细胞和组织中某些化学成分含量的变化。因此，组织制片技术是教学、医学和科研中不可缺少的一一个组成部分。

二节制片的种类

一、组织切片法:

任何组织切片必须依靠切片机将组织切成薄片（厚度以μm计），再进行染色而得到结果。在切成薄片以前必须设法使组织内部渗入足够的支持物质，使组织保持一定的硬度，然后使用切片机进行切片。渗透到组织中的支持剂（物质）有多种，如石腊、明胶、火棉胶、碳蜡和塑料等。

病理学研究中最常用的组织切片技术是常规石蜡切片和冷冻切片。其要点是将研究的组织进行切片，然后进行各种染色。冰冻组织切片法是直接利用快速冷冻法进行切片。

二、组织非切片法

不用切片机，不经过切片手续而制成组织切片的方法，包括整体封藏法、浮片法、压碎法和组织直接印片法。这些方法操作简单而快，可根据制片的需要进行选择使用。

第三节石蜡切片技术

石蜡切片法组织切片的主要程序:.

一、取材

取材是根据实验目的及临床活检、尸解组织的病变程度而合理取得组织材料。为了制作优质的切片，取材时组织愈新鲜愈好，并应及时固定。（一）病理标本的来源及分类:

病理标本的来源有临床活检、尸体解剖、实验动物、培养细胞。主要病理标本大致可分类如下:

1、手术标本

2、内镜取材标本

3、穿刺取材标本

4、细胞学标本可分为:痰、尿、阴道分泌物、胸水腹水、穿刺细胞学标本、内镜刷取标本、其它等。

（二）取材的一般原则

1、认真观察，取准标本病变部位，切勿漏取。

2、要能全面反映出器官有无病变，显示病变全貌（大面积），包括肿瘤转移部位、切缘等。

3、根据临床或肉眼所见及病史提示对病变组织多取材，主要病变与相关组织多取材，特殊病变要尽量多取材。

4、若取材大小受限，应尽量取包含病变周边相对正常组织。

5、应避免选取凝血块、坏死组织及粘液成分。

6、要全面描述病变状况，由表及里，测重量、部位、体积等。（三）取材方法常见标本取材方法如下:

1、阑尾炎标本

2、肿瘤标本

3、胃标本

4、肠标本

5、肺、肾脏标本

6、乳腺癌根治标本

7、子宫标本

8、卵巢与输卵管囊肿标本

9、淋巴结标本

10、一般小标本

（四）取材注意事项

1、新鲜2、配合3、目的4、部位

5、避免挤压6、大小

7、数量8、方向9、标记10、手术11、小标本12、交叉污染

（五）临床病理取材注意事项

姓名、样本、件数

二、组织固定

（一）固定的作用:

1、保持细胞与生活时的形态相似。

2、保持细胞内特殊的成分转变成不溶性物质。

3、使组织中的各种物质沉淀和凝固起来，以便染色后易于区别和观察。4、固定剂兼有硬化作用，使组织硬化增加组织硬度，便于制片。

（二）原理:使组织及细胞内蛋白凝固；使有关成分沉淀、变性，成为不溶性物

（三）方法:浸泡、灌注（局部灌注、全身灌注）、蒸汽熏蒸

（四）固定时间:一般固定液在24小时内不能穿透厚度大于2~3mm的实体组织或0.5cm的多孔疏松组织。

常规组织病理学:可长时间固定

细胞病理学:可长时间固定

细胞化学:不宜过长，约1小时为宜

（五）固定注意事项

1.固定液有毒性，注意自身防护

2.及时，尽可能新鲜。

3.超微结构观察:低温固定

4.注意不同研究目的对固定液的特殊需要

5.固定液用量:足，必要时及时更换。一般应为组织块总体积的4~5倍，也可达15~20倍。

（六）常用的固定液:

1、单纯固定液:甲醛、乙醇、丙酮、戊二醛、醋酸、4%多聚甲醛

2、混合固定液:乙醇一甲醛液（AF液）、B5固定液（醋酸钠一升汞一甲醛）、Bouin氏液、Carnay氏液、Zenker固定液、氯化汞、苦味酸、重铬酸钾、AAF液、甲醛一生理盐水等。