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石蜡切片的制片方法。
高质量的病理切片是病理学家做出正确诊断的先决条件。由于各种原因,在日常病理工作中,常常导致病理切片质量差,导致诊断医生镜下诊断困难。切片机制作是一个连续复杂的过程,每一个环节都至关重要。为了做好切片工作,必须在每一个环节上下功夫。针对各环节对制片的影响,提出相应的处理方法。
样品固定要充分及时。
标本固定是制片的主要因素。如果不及时充分固定,组织会干燥、收缩、变硬,甚至自溶,直接影响病理诊断。正确的固定方法是:组织离体后立即放入固定液中,固定液的量应足够(固定液一般是标本体积的10倍),容器取决于标本的大小,使标本放入后不会变形。对于较大的标本,可以在固定前沿其切面切割。
样品取材应规范。
标本可以在完全固定后取材。小型标本一般都是制片的,大型标本应该在病变部位、病变部位和正常组织交界处多处取材。取出的组织块应形状规则,尺寸适中,厚度一致,一般为1.5cm×1.5cm×0.2cm。对某些组织的取料可以灵活掌握,对硬、韧的组织可以取薄一些,骨组织的取料应该在脱钙充分之后进行,用大头针轻扎骨组织可以穿入。取料时切忌用力挤压,否则组织会受到压迫。
试剂更换试剂。
取材后的组织在处理过程中,各种试剂挥发,试剂浓度降低,或者在试剂中混入其他试剂和组织碎屑,影响组织脱水、透明、蜡浸渍、组织污染,引起误诊。因此,应根据标本量的大小定期更换或观察组织处理状况,分析原因,更换相应的试剂。
包埋和切片碎组织,应包埋在同一平面上,包埋时可用热镊子将预制好的蜡块表面熔化,将碎组织全部包埋在同一平面上,待表面初凝后,立即用光滑的金属板轻压片刻,使组织更加平整。小型组织应呈线状包埋;大型组织应在包埋时将其压平,以防止因切片不完整和片内组织杂乱而造成误诊。切片机前应将刀磨锋利,防止切片断裂、破碎。切片机应固定好,防止损坏切片刀和组织块。切片机必须完整,不仅要切出每一个组织,还要切到面,防止漏诊。捞出前可在载玻片上涂50%蛋白甘油,防止脱片。
染色和密封要小心。
烤箱内的切片烘烤一般需要65℃30min左右。温度过低,时间过短,组织脱蜡不全,染色容易发生脱片或不上色;温度过高,时间过长,组织容易变黑,染色不清。盐酸乙醇在染色过程中的分化非常重要。如果分化不足,切片会出现蓝色染色,影响伊红着色;如果分化过度,细胞核着色过淡,此时可以适当延长温水中的蓝色返回时间。当切片上的二甲苯未干燥时,应防止色素的产生。
为了提高石蜡切片的质量,必须规范、认真地制作制片的各个环节,在实践中不断探索、总结、创新,为病理诊断提供有力的技术保障。