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生物切片主要包括以下几个步骤:准备样本、固定处理、脱水和浸渍、包埋、切片和染色、显微观察等。
首先,准备样本是生物切片的开始。在选择实验动物或植物时,我们需要根据实验的需求选择不同的模型生物,并从中获取适合切片的组织或器官。比如,在全鸟胚发育研究中,可以选择鸟的卵细胞作为切片样本。
其次,固定处理是将样本中的细胞和组织结构固定在切片过程中不受破坏的状态。常用的固定处理方法包括冷冻固定、酒精固定和甲醛固定等。不同的固定方法对应不同的实验需求和样本类型,例如冷冻固定可以保留细胞活性,酒精固定适用于一些较大的组织等。
接下来,脱水和浸渍是为了去除样本中的水分,并使切片与嵌入材料充分接触,保证样本在切割过程中不会变形。脱水通常使用浓度递增的酒精溶液进行处理,同时也可以使用其他的有机溶剂,如乙醇和二甲苯等。
然后,包埋是将脱水后的样本在嵌入材料中固定,以便切割出薄片。常用的嵌入材料有石蜡和树脂等。石蜡适用于一般常规切割,而树脂则适用于高分辨率显微观察。
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